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东阳光"一种提高重组人凝血因子VIII高效表达的方法"专利

2017年12月申请,具体如下:

A型血友病是一种常见的X性连锁遗传性出血病,在所有血友病中占85%,发病原因于1950年代被发现,1960年代开始血液提取进行治疗,1970年代实现患者在家自我注射治疗,1980年代爆发了患者感染肝炎病毒和HIV病毒事件,1990年代开始采用重组人凝血因子治疗,从2000年代开始对重度血友病患者推荐日常预防性治疗。血友病的平均发病率约为5-10/10万,因此估计全球约有40万患者,中国约有10 万。2014年,血友病联盟(WorldFederation of Hemophilia,WFH)对登记在册的血友病人数调查显示,全球约为17.85万人,而中国仅有11108人登记在册。中国每万人口的血友病人数仅为0.08,而欧洲发达国家约为1,美国为0.54,印度为0.14,整体看来,中国的血友病诊断和治疗覆盖率还存在很大差距。

目前FDA已经批准了15个用于治疗A型血友病的重组人凝血因子VIII(Recombinant Human Coagulation Factor VIII)产品。其中Advate(百因止)、Kogenate(拜科奇)、Xyntha(任捷)已经进入中国。目前全球的因子VIII销售年达到了70亿国际单位,其中60%为基因工程重组凝血因子VIII。rhFVIII 具有与血源性F8相似的生物学效应,但产量不受血源供应的影响,且避免了HBV、HCV、HIV等血源性病毒感染的发生,rhFVIII在中国血友病A患者的使用中,具有较好的有效性及安全性。然而,批准进入中国的拜科奇与百因止价格昂贵,并且中国目前还不能生产重组人凝血因子,加上血友病A目前尚不能治愈,因此需要终生使用rhFVIII进行替代治疗。使得费用问题成为我国绝大多数A型血友病患者治疗的主要限制性因素,因此,自主研发生产rF8对于国内患者需求的满足有着积极的意义。

体外真核细胞表达的BDD-F8蛋白显示出较好的凝血生物活性,但缺点为容易降解。为了提高rhFVIII 的表达量并且降低蛋白的降解,科学家曾在哺乳动物细胞中共转染rhFVIII和VWF基因,稳定rhFVIII的表达,但这该方法存在一定的局限性。研究发现,VWF与rhFVIII共表达,造成外源DNA进入细胞过载,细胞株构建比较复杂,同时细胞共表达压力,导致rhFVIII的表达量比较低,筛选出的高表达vWF等稳定因…